通常導(dǎo)致溶出方法需要被調(diào)查的場(chǎng)景包括：

• 不合規(guī)格結(jié)果（OOS）

• 趨勢(shì)外結(jié)果（OOT）

• 結(jié)果可變性增加

• 進(jìn)展到第2或3階段測(cè)試

• 溶媒準(zhǔn)備過(guò)程中的觀察到問(wèn)題

• 溶出過(guò)程中觀察到異常

• 實(shí)驗(yàn)室或溶出設(shè)備之間方法轉(zhuǎn)移過(guò)程中的不可比性

• 引入自動(dòng)化溶出裝置

本綜述參考James Mann等的《Dissolution Method Troubleshooting: An Industry Perspective》內(nèi)容，對(duì)溶出方法調(diào)查和異常處理的經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)和最佳實(shí)踐進(jìn)行了總結(jié)。此外，還提供了真實(shí)的行業(yè)案例研究，以舉例說(shuō)明導(dǎo)致溶出測(cè)試方法異常的各種異常成因，并為各位研究溶出的同仁帶來(lái)偏差調(diào)查與溶出度實(shí)驗(yàn)管理的啟迪。

溶出的偏差調(diào)查

溶出實(shí)驗(yàn)可被視為三種不同的活動(dòng)的總和：獲取分析用樣品的程序、樣品的分析和化學(xué)分析溶出結(jié)果的計(jì)算。我們建議實(shí)驗(yàn)室的調(diào)查工作常常使用魚骨圖（圖1）來(lái)展開(kāi)。它是一個(gè)因果系統(tǒng)的可視化表示，可以幫助分析問(wèn)題的根本原因，并廣泛用于制藥行業(yè)的各種應(yīng)用。它允許對(duì)所有可能被忽視的潛在原因進(jìn)行頭腦風(fēng)暴。用于溶出調(diào)查的魚骨分為六個(gè)重點(diǎn)領(lǐng)域：設(shè)備、方法、物料、計(jì)算、人員和環(huán)境。這些領(lǐng)域中的每一個(gè)都是在溶出方法偏差調(diào)查的背景下進(jìn)行小組討論的。

1. 物料

在任何溶出方法調(diào)查中要考慮的物料主要分為三類：用于制備溶出介質(zhì)的成分、標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試的藥物產(chǎn)品。

1.1 溶出介質(zhì)的制備

對(duì)于溶出介質(zhì)，簡(jiǎn)單檢查試劑重量以及是否使用了正確等級(jí)的試劑是一個(gè)很好的起點(diǎn)。觀察到的常見(jiàn)錯(cuò)誤包括未正確理解磷酸鹽等水合鹽。例如，使用二水合物而不是一水合物或無(wú)水鹽，這會(huì)對(duì)緩沖液濃度產(chǎn)生后續(xù)影響。無(wú)水鹽如果儲(chǔ)存不當(dāng)，可能會(huì)與水結(jié)合，這可能會(huì)導(dǎo)致稱量制備合適緩沖液濃度所需的正確鹽質(zhì)量的問(wèn)題。

此外，一元鹽和二元鹽可以以與通常不同的方式混合并調(diào)節(jié)至正確的pH，這與使用正確的鹽相比，會(huì)產(chǎn)生不同的介質(zhì)總組成。通過(guò)確保記錄物料添加的明確順序和調(diào)整前的預(yù)期pH值，以及與預(yù)期pH值的任何差異，分析師可以暫停并檢查pH值超出預(yù)期值的原因，從而避免這種情況。

對(duì)于大部分溶出介質(zhì)的制備，必須確保其充分混合，這在從濃縮物中稀釋以確保在等分之前形成均勻的溶液時(shí)尤為重要。例如，案例研究2表明，對(duì)于緩沖系統(tǒng)中50L或更大的介質(zhì)體積，需要1min/L或更長(zhǎng)的混合時(shí)間。此外，如果使用pH值作為大型容器混合的確認(rèn)，則應(yīng)從不同深度的多個(gè)點(diǎn)取樣。

標(biāo)準(zhǔn)做法還應(yīng)確保所有試劑均已正確儲(chǔ)存，且在保質(zhì)期內(nèi)。還應(yīng)考慮緩沖液的污染，無(wú)論是來(lái)自使用未充分沖洗的相同設(shè)備的先前溶出介質(zhì)，還是來(lái)自微生物污染。后者的一個(gè)例子是儲(chǔ)存在水溶液中的氦噴射玻璃料內(nèi)的微生物生長(zhǎng)，通過(guò)確保氦氣噴射玻璃料在使用之間儲(chǔ)存在甲醇 : 水（50:50）中，解決了這個(gè)問(wèn)題。

第一個(gè)案例研究說(shuō)明了在使用溶出介質(zhì)濃縮液時(shí)，不正確的介質(zhì)制備和人為錯(cuò)誤的綜合影響。第二個(gè)案例研究說(shuō)明了大量溶出介質(zhì)不全部混合的影響，以及驗(yàn)證溶出介質(zhì)制備質(zhì)量的pH測(cè)量的局限性。

案例1：從濃縮液中制備溶出介質(zhì)

在500mL pH 5.5的乙酸鹽緩沖液中，使用槳法以75rpm進(jìn)行片劑制劑的溶出試驗(yàn)。為方便起見(jiàn)，制備了10倍的緩沖液濃縮液，并在每次分析之前使用溶媒制備系統(tǒng)用水簡(jiǎn)單稀釋至最終緩沖液濃度。圖2顯示了遵循該程序的開(kāi)發(fā)批次的溶出曲線，顯示了快速且穩(wěn)定的釋放。在第一次臨床批量發(fā)布期間，應(yīng)用上述方法時(shí)觀察到虛線曲線，導(dǎo)致OOS結(jié)果。

在調(diào)查過(guò)程中，確定pH 5.5的最終1x乙酸鹽緩沖液再次稀釋1:10，假設(shè)其仍然是10倍濃縮液。因此，以低10倍的濃度制備溶出緩沖液。用正確制備的緩沖液重復(fù)溶出分析。如圖2所示，臨床批次的溶出符合第2階段的溶出接受標(biāo)準(zhǔn)（30分鐘時(shí)Q=80%）。開(kāi)發(fā)批次和第一批臨床批次之間的差異歸因于顆粒粒度分布的差異，這在隨后的研究中進(jìn)行了分析。

一般來(lái)說(shuō)，緩沖濃縮液的使用增加了可變性的來(lái)源；然而，這一過(guò)程的時(shí)間和資源效益被認(rèn)為是對(duì)這一潛在錯(cuò)誤的補(bǔ)償。此外，精心設(shè)計(jì)的控制措施，如審計(jì)跟蹤和文件檢查，即使在早期開(kāi)發(fā)階段，也能確保過(guò)程和產(chǎn)品質(zhì)量。

案例研究2：固體試劑制備緩沖液

膠囊制劑的溶出試驗(yàn)使用槳法以75rpm在900mL pH 5.5的檸檬酸鹽磷酸鹽緩沖液中進(jìn)行。為方便起見(jiàn)，通過(guò)將固體鹽溶出在制備容器中的水中并攪拌直至預(yù)期全部溶出來(lái)制備大量緩沖液。進(jìn)行pH測(cè)量以驗(yàn)證緩沖液制備是否正確。使用這種溶出方法通?？梢杂^察到快速和穩(wěn)健的分布。然而，在初始穩(wěn)定性期間，一個(gè)時(shí)間點(diǎn)的測(cè)試顯示出異常高的變異性，多個(gè)OOS結(jié)果。這是在多個(gè)膠囊強(qiáng)度、批次和儲(chǔ)存條件下觀察到的。對(duì)溶出數(shù)據(jù)的系統(tǒng)研究揭示了特定批次制備的溶出介質(zhì)中溶出行為隨時(shí)間變化的趨勢(shì)。圖3顯示了不同測(cè)試批次在45分鐘時(shí)的藥物釋放百分比（六次重復(fù)的平均值），作為測(cè)試順序的函數(shù)繪制。每個(gè)垂直網(wǎng)格線代表一個(gè)測(cè)試日，并指示單獨(dú)的介質(zhì)準(zhǔn)備。

進(jìn)一步的研究揭示了150L的溶出介質(zhì)制備，攪拌78分鐘。雖然攪拌時(shí)間和溶出介質(zhì)體積本身都不是非典型的，但較短的混合時(shí)間和較大混合溶媒體積的組合導(dǎo)致了一種假設(shè)，即混合不充分，且溶媒成分在其使用中不一致。為了驗(yàn)證這一假設(shè)，收集了這批溶出介質(zhì)中收集的溶出樣品，并測(cè)試了pH、電導(dǎo)率、滲透壓和鈉、檸檬酸鹽和磷酸鹽的離子濃度。

圖4顯示了45分鐘時(shí)的溶出情況以及作為測(cè)試順序函數(shù)的介質(zhì)pH值和電導(dǎo)率。綠色帶表示正確制備的介質(zhì)的pH值和電導(dǎo)率的預(yù)期范圍。溶出性能與所用等分溶媒的pH值直接相關(guān)。盡管所用介質(zhì)前半部分的pH值符合規(guī)范（導(dǎo)致如預(yù)期的溶出），但除使用中點(diǎn)附近的一小部分介質(zhì)外，所有介質(zhì)的電導(dǎo)率都在正確范圍之外。測(cè)量的滲透壓摩爾濃度和離子濃度與電導(dǎo)率的趨勢(shì)相似，盡管有一些偏差。實(shí)際上，沒(méi)有一份溶出介質(zhì)的成分正確。對(duì)該裝置的大批溶媒制備的溶媒體積和混合時(shí)間的分析導(dǎo)致需要1min/L或更長(zhǎng)的混合時(shí)間，以確保50L或更大體積的溶媒充分混合。

本案例研究表明，pH值測(cè)量不是正確的溶媒制備或混合程度的充分指標(biāo)。如果未使用其他度量（例如電導(dǎo)率），則如果要使用pH值確認(rèn)混合，則應(yīng)從大型容器不同深度的多個(gè)點(diǎn)取樣。這也說(shuō)明了保存樣本解決方案的好處，直到所有數(shù)據(jù)都得到分析、趨勢(shì)化，所有所需的調(diào)查都完成。

1.2 表面活性劑

如果化合物表現(xiàn)出較差的溶出度，則表面活性劑通常是用于實(shí)現(xiàn)漏槽條件的溶出介質(zhì)的成分。十二烷基硫酸鈉（SLS）是一種常用的表面活性劑，盡管它可能是溶出缺陷的來(lái)源，如在鉀離子存在下沉淀。不同等級(jí)的SLS質(zhì)量可能會(huì)在溶出試驗(yàn)的分析完成過(guò)程中因雜質(zhì)引起干擾，并可能影響介質(zhì)的增溶能力。接下來(lái)的兩個(gè)案例研究證明了表面活性劑對(duì)溶出的潛在非預(yù)期影響，例如表面活性劑由于活性物質(zhì)的存在而導(dǎo)致樣品降解（案例研究3）以及表面活性劑與藥物物質(zhì)結(jié)合，阻礙溶出（案例研究4）。

案例研究3：表面活性劑引起的降解

藥物在溶出介質(zhì)中的化學(xué)穩(wěn)定性是方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中需要考慮的重要因素。如果藥物在溶出介質(zhì)中降解，溶出試驗(yàn)期間檢測(cè)到的藥物量可能比實(shí)際溶出的藥物量低得多。由于在特定pH條件下的化學(xué)不穩(wěn)定性，經(jīng)常觀察到藥物降解，在開(kāi)發(fā)方法時(shí)，應(yīng)在溶出介質(zhì)選擇過(guò)程中考慮到這一點(diǎn)。在某些情況下，溶出介質(zhì)中的雜質(zhì)（可由表面活性劑引入）可加速活性藥物的降解。

在本案例研究中，配制成速釋薄膜包衣片劑的化合物X表現(xiàn)出氧化降解，在某些情況下，在溶出試驗(yàn)的后期時(shí)間點(diǎn)導(dǎo)致溶出量明顯減少（圖5）。

即使在不太異常的情況下，降解不會(huì)導(dǎo)致溶出時(shí)間點(diǎn)的明顯趨勢(shì)，溶出樣品溶液的評(píng)估也發(fā)現(xiàn)溶液穩(wěn)定性非常有限，不到24小時(shí)。對(duì)降解途徑的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在樣品溶液中生成了兩種已知的氧化降解產(chǎn)物，通過(guò)高效液相色譜（HPLC）進(jìn)行了定量，這兩種產(chǎn)物都是在活性藥物成分（API）的過(guò)氧化物脅迫下形成的。

這導(dǎo)致了一種假設(shè)，即這種降解是由于Fenton型與聚山梨醇酯80（其作為溶出介質(zhì)中的表面活性劑）中存在的過(guò)氧化物的反應(yīng)，由源自片劑薄膜涂層的鐵催化。Fenton反應(yīng)包括通過(guò)Fe（II）/Fe（III）催化將有機(jī)過(guò)氧化物轉(zhuǎn)化為過(guò)氧基和烷氧基。減少溶出過(guò)程中降解的緩解策略集中于過(guò)氧化物和鐵成分（例如使用下圖的鍍膜槳葉）。

已知聚山梨醇酯表面活性劑在暴露于空氣中時(shí)會(huì)發(fā)生氧化降解，過(guò)氧化物在表面活性劑中積聚。從不同供應(yīng)商獲得的多批聚山梨醇酯80中定量過(guò)氧化物的量，并打開(kāi)不同的時(shí)間長(zhǎng)度?；谶@些結(jié)果，聚山梨醇酯80的使用期限被限制在從打開(kāi)起的30天內(nèi)，并且確定了優(yōu)選的供應(yīng)商。此外，向溶出介質(zhì)中加入乙二胺四乙酸（EDTA），通過(guò)螯合催化鐵（II）和鐵（III）離子來(lái)提高樣品穩(wěn)定性，從而防止產(chǎn)生過(guò)氧和烷氧基。也有報(bào)道稱，螯合劑可能不會(huì)抑制Fenton反應(yīng)，而是淬滅生成的自由基。事實(shí)上，發(fā)現(xiàn)這種方法可以顯著減少溶出樣品中化合物X的氧化降解，使樣品的穩(wěn)定性達(dá)到3天，在此期間僅損失0.2%的效力。值得注意的是，與不含EDTA的樣品相比，含有EDTA的樣品表現(xiàn)出特征氧化降解產(chǎn)物的最小增長(zhǎng)。因此，對(duì)溶出方法進(jìn)行了修訂，將EDTA加入溶出介質(zhì)中。

還探討了向溶出介質(zhì)中加入丁基化羥基甲苯（BHT）以淬滅過(guò)氧基和烷氧基。觀察到氧化降解產(chǎn)物的生長(zhǎng)較低，但在樣品溶液中形成了化合物X-BHT加合物。因此，在這種情況下，BHT不是改善溶液穩(wěn)定性的可行添加劑。

案例研究4：溶出介質(zhì)的表面活性劑污染

膠囊制劑的溶出試驗(yàn)使用槳法以75rpm在900mL pH 5.5的檸檬酸鹽磷酸鹽緩沖液中進(jìn)行。在將溶出方法轉(zhuǎn)讓給第三方期間，觀察到與方法開(kāi)發(fā)期間觀察到的溶出性能相比，溶出性能下降。已知在足夠大的SLS濃度下，藥物物質(zhì)與SLS形成不溶性絡(luò)合物。圖6顯示了設(shè)計(jì)方法（無(wú)SLS）和SLS濃度范圍內(nèi)的溶出情況。在10 ppm SLS下，無(wú)法全部釋放。

在調(diào)查過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)溶出介質(zhì)制劑試劑瓶之前接觸過(guò)SLS。此外，使用高分辨率液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）分析導(dǎo)致意外低溶出性能的溶出介質(zhì)，結(jié)果顯示其含有0.3ppm SLS。SLS的這一水平與方法轉(zhuǎn)移過(guò)程中觀察到的溶出性能下降一致。因此，新的藥筒專門用于該藥物產(chǎn)品，確保只有該項(xiàng)目的溶出介質(zhì)接觸表面。這一實(shí)踐以及設(shè)備和介質(zhì)相互作用的完整歷史，對(duì)于準(zhǔn)確測(cè)試對(duì)某些雜質(zhì)的痕量濃度敏感的化合物非常重要。

1.3 酶

溶出測(cè)試中使用的另一種需要仔細(xì)考慮的物料是：當(dāng)觀察在溶出實(shí)驗(yàn)中到明膠膠囊交聯(lián)時(shí)使用的酶。例如，USP通用章節(jié)“溶出"規(guī)定，在二級(jí)測(cè)試期間，可以向溶出介質(zhì)中添加“導(dǎo)致活性不超過(guò)750000單位/L的胃蛋白酶"。這意味著要正確計(jì)算添加到溶出介質(zhì)中的酶的質(zhì)量，需要考慮USP級(jí)酶的分析證書（CoA）上的值。通常對(duì)于胃蛋白酶，需要使用蛋白質(zhì)的百分比和蛋白質(zhì)的單位/mg來(lái)正確計(jì)算所需的量。閱讀CoA時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎，因?yàn)橐恍┕?yīng)商報(bào)告蛋白質(zhì)和胃蛋白酶單位/mg蛋白質(zhì)的百分比，而其他供應(yīng)商則直接報(bào)告胃蛋白酶單位/mmg產(chǎn)品?；蛘撸梢愿鶕?jù)USP程序通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)定活性。還應(yīng)注意，美國(guó)藥典關(guān)于最大胃蛋白酶活性的規(guī)范是以濃度給出的。因此，在改進(jìn)的Tier 2方法中，在添加表面活性劑之前，將酶添加到較低體積的緩沖液中，應(yīng)適當(dāng)計(jì)算較小體積的酶添加量。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)品

應(yīng)確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)品的同一性和相關(guān)純度，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品是不同于待溶出分析藥物的鹽或共晶形式時(shí)，應(yīng)特別注意效價(jià)轉(zhuǎn)換。紫外分析常用作溶出檢測(cè)方法。因此，由于在最終值中考慮了有機(jī)雜質(zhì)，標(biāo)準(zhǔn)品的UV純度值通常與色譜分析中使用的值不同。

1.5 樣品

最后，溶出樣品本身存在可變性和誤差，因此應(yīng)進(jìn)行檢查，以確保其正確性、適當(dāng)?shù)臉?biāo)簽、適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)室儲(chǔ)存和正確的包裝。通常，溶出方法調(diào)查得出的結(jié)論是，方法或分析沒(méi)有發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，這會(huì)引發(fā)對(duì)產(chǎn)品制造的進(jìn)一步調(diào)查。這種程度的調(diào)查超出了本文的范圍。然而，在充分了解特定樣品的預(yù)期性能的情況下，在方法研究中使用控制或參考樣品通常是有用的，因?yàn)檫@有助于確定問(wèn)題是否與方法或測(cè)試的單個(gè)批次有關(guān)。

2.設(shè)備

方法問(wèn)題的最大原因是溶出設(shè)備。這可能是由于在基本上相同的設(shè)備上運(yùn)行的方法，但分析人員沒(méi)有意識(shí)到制造商、水浴模型、自動(dòng)化方法和/或軟件之間存在的一些根本差異。

在設(shè)備調(diào)查期間進(jìn)行簡(jiǎn)單的初始檢查，就像檢查是否與之前的實(shí)驗(yàn)和設(shè)備維護(hù)目視檢查有任何不同一樣簡(jiǎn)單。檢查儀器日志、運(yùn)行報(bào)告和實(shí)驗(yàn)中的任何錯(cuò)誤日志，通常可以在運(yùn)行之前或運(yùn)行期間識(shí)別系統(tǒng)中的任何異常。應(yīng)驗(yàn)證浴槽的合格狀態(tài)，確保所有運(yùn)行前檢查，例如溫度和槳葉高度。觀察到的一個(gè)例子是，分析人員未能進(jìn)行正確的運(yùn)行前檢查，并且未能觀察到一溶出杯中的槳滑到25mm以下，并撞擊在溶出杯底部的藥片。

已經(jīng)觀察到金屬表面在酸性介質(zhì)中的降解，導(dǎo)致藥物物質(zhì)的金屬催化降解。這也可能是取樣套管和自動(dòng)取樣器針的問(wèn)題。因此，確保設(shè)備維護(hù)良好且無(wú)任何表面銹蝕是確保結(jié)果一致的關(guān)鍵步驟。聚四氟乙烯（PTFE）涂層槳可用于解決這一問(wèn)題；然而，需要注意涂層不會(huì)被劃傷，因?yàn)閯澓劭赡軙?huì)導(dǎo)致降解區(qū)域或在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)過(guò)飽和的成核位置。

如果使用籃法（USP裝置1），則必須檢查是否使用了正確的網(wǎng)目尺寸，以及籃的狀況是否可以接受，因?yàn)檫@些籃筐通常容易因處理不當(dāng)而變形。為了防止這種情況，可以使用工具插入和移除籃子，而不會(huì)使網(wǎng)格變形。

2.1 脫氣設(shè)備

如果脫氣對(duì)方法性能至關(guān)重要，則應(yīng)檢查脫氣設(shè)備，以確保其提供足夠質(zhì)量的介質(zhì)。這可以通過(guò)使用溶解氧計(jì)對(duì)介質(zhì)進(jìn)行外部檢查來(lái)實(shí)現(xiàn)，以確保37°C時(shí)的濃度低于6 mg/L。脫氣失敗的例子是由于易腐蝕片劑表面存在氣泡而導(dǎo)致溶出較慢，導(dǎo)致片劑與介質(zhì)接觸減少，以及由于篩網(wǎng)被氣泡堵塞而導(dǎo)致通過(guò)籃式篩網(wǎng)的介質(zhì)流量減少。當(dāng)氣泡增加了顆粒的浮力并導(dǎo)致錐形減少，導(dǎo)致整個(gè)容器中的固體更加分散時(shí)，也觀察到由于脫氣不足而導(dǎo)致的更快溶出。

2.2 紫外分光光度計(jì)

如果紫外分光光度計(jì)通過(guò)儀器自檢，則不太可能出現(xiàn)問(wèn)題；然而，應(yīng)確認(rèn)UV波長(zhǎng)的設(shè)置方法是正確的。如果使用含有比色皿轉(zhuǎn)換裝置的在線UV發(fā)現(xiàn)單個(gè)溶出杯OOT問(wèn)題，則應(yīng)檢查該溶出杯線上是否連接了正確的路徑長(zhǎng)度的導(dǎo)管。同樣值得檢查的是，所有配件是否牢固，因?yàn)樗蓜?dòng)的配件可能會(huì)導(dǎo)致空氣進(jìn)入導(dǎo)管或無(wú)法將正確的樣本量拉過(guò)來(lái)比色皿中，這可能會(huì)導(dǎo)致異常讀數(shù)，從而影響溶出曲線。

2.3 自動(dòng)溶出系統(tǒng)

溶出方法的自動(dòng)化和自動(dòng)化系統(tǒng)之間的轉(zhuǎn)移通常是問(wèn)題的根源。這可能是因?yàn)榉治鰩煵涣私庀到y(tǒng)如何收集樣本。自動(dòng)進(jìn)樣器參數(shù)（如初始體積、凈化體積、泵流量和系統(tǒng)管道體積）的錯(cuò)誤選擇或定義可能會(huì)導(dǎo)致問(wèn)題。這些設(shè)置不僅存在于單獨(dú)的方法設(shè)置中，還作為系統(tǒng)配置文件的一部分，并且根據(jù)您是收集到小瓶中還是進(jìn)行在線UV，體積有所不同；例如，如果使用注射器過(guò)濾器，體積將發(fā)生變化。不正確的設(shè)置可能會(huì)導(dǎo)致自動(dòng)采樣器無(wú)法在下一個(gè)時(shí)間點(diǎn)之前完成所有活動(dòng)，導(dǎo)致無(wú)法在所需時(shí)間采集樣本，或者充注和吹掃不足可能會(huì)導(dǎo)致采樣管線中的前一個(gè)時(shí)間，從而稀釋下一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，產(chǎn)生低于預(yù)期的結(jié)果。第五個(gè)案例研究中展示了自動(dòng)取樣器設(shè)置的影響

案例5：自動(dòng)取樣設(shè)置

在槳法上對(duì)25°C/60%相對(duì)濕度（RH）和30°C/75%相對(duì)濕度下儲(chǔ)存的12個(gè)月穩(wěn)定性樣品進(jìn)行了速釋片劑制劑的溶出試驗(yàn)。30°C/75%相對(duì)濕度的樣品在溶出度儀A上使用它的自動(dòng)采樣器B運(yùn)行，而25°C/60%相對(duì)濕度條件的樣品在也使用它的另一款自動(dòng)取樣器C上運(yùn)行。30°C/75%RH樣品的溶出曲線比25°C/60%RH樣品慢。藥物溶出百分比的差異在5分鐘時(shí)接近40%，在60分鐘時(shí)大約10%。之前在早期的穩(wěn)定時(shí)間點(diǎn)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)這種差異。12個(gè)月的30°C/75%相對(duì)濕度曲線與早期穩(wěn)定時(shí)間點(diǎn)的曲線相比，也是OOT。

在初步實(shí)驗(yàn)室調(diào)查中，發(fā)現(xiàn)兩臺(tái)自動(dòng)取樣器B與C雖然型號(hào)相同，但方法設(shè)置不同。用于運(yùn)行30°C/75%相對(duì)濕度樣品的自動(dòng)取樣器的泵流量為10 mL/min，采集偏移量（offset volume）為2.0 mL，而用于運(yùn)行25°C/60%相對(duì)濕度樣品，自動(dòng)取樣器的流量為15 mL/min，偏移量（offset volume）為3.5 mL。偏移量（offset volume）定義為樣品采集前丟棄的介質(zhì)體積。據(jù)推測(cè)，溶出曲線的差異是由自動(dòng)進(jìn)樣器設(shè)置的差異造成的。

再次運(yùn)行12個(gè)月的30°C/75%RH片劑，自動(dòng)進(jìn)樣器方法設(shè)置更改為15 mL/min流速和3.5 mL偏移量。圖7顯示了來(lái)自兩種不同自動(dòng)進(jìn)樣器方法設(shè)置的30°C/75%RH片劑的兩種溶出曲線的比較。在15mL/min流速和3.5mL偏移體積下獲得的新曲線比之前在10mL/min流速和2.0mL偏移體積下得到的曲線更快。在改變自動(dòng)采樣器方法設(shè)置的情況下，12個(gè)月30°C/75%相對(duì)濕度樣本的分布與25°C/60%相對(duì)濕度樣本以及之前穩(wěn)定時(shí)間點(diǎn)的歷史趨勢(shì)相匹配（使用相同的自動(dòng)采樣器設(shè)置）

為了調(diào)查哪個(gè)參數(shù)更為關(guān)鍵，即流速或偏移量，再次使用自動(dòng)取樣器將30°C/75%RH樣品設(shè)置為10 mL/min流速和3.5 mL偏移量。與之前使用15 mL/min流量和3.5 mL偏移量獲得的曲線相比，沒(méi)有觀察到溶出曲線的顯著差異，表明低偏移量（2.0 mL）是初始運(yùn)行時(shí)溶出曲線似乎較慢的根本原因。較低的偏移量不足以清除之前取樣時(shí)間點(diǎn)殘留在管道中的樣品。

最后，為了進(jìn)一步證實(shí)這一發(fā)現(xiàn)，制備了預(yù)溶出的藥物溶液，并使用不同的自動(dòng)進(jìn)樣器設(shè)置（2.0 vs.3.5 mL偏移體積，15 mL/min流速）進(jìn)行了兩次試驗(yàn)。每個(gè)容器的取樣針在水中放置5分鐘時(shí)間點(diǎn)，然后在15分鐘的下一個(gè)時(shí)間點(diǎn)放置到含有預(yù)溶出溶液的容器中。使用3.5 mL的偏移體積，結(jié)果顯示在15分鐘時(shí)幾乎100%溶出，與預(yù)溶出濃度一致。在2.0-mL的偏移量下，結(jié)果小于65%的溶出回收率，表明管道中殘留的水具有顯著的稀釋效果。這一觀察結(jié)果證實(shí)，3.5mL的偏移量足以沖洗掉之前的樣品，而2.0mL則不足以。本案例研究證明了理解自動(dòng)取樣器功能的重要性，并使用足夠的偏移量來(lái)替換管道中的先前樣品，確保樣品代表實(shí)際采樣點(diǎn)。

同時(shí)調(diào)查觀察到的自動(dòng)化引起的其他問(wèn)題包括：0% 溶出在一個(gè)溶出杯中，然后在下一次運(yùn)行中，由于片劑卡在樣品盒中，導(dǎo)致200%溶出。該問(wèn)題可能由片劑幾何形狀引起（或加劇），可能需要確保片劑的最小尺寸與溶出系統(tǒng)的片劑分配機(jī)構(gòu)中的孔徑一致對(duì)齊。

半球底部裝有閥門的全自動(dòng)系統(tǒng)的另一個(gè)常見(jiàn)問(wèn)題是，容易出現(xiàn)錐體的配方會(huì)加劇錐體，這是因?yàn)榕c傳統(tǒng)設(shè)計(jì)相比，容器底部整體“更平坦"。下一個(gè)案例研究側(cè)重于自動(dòng)化設(shè)備之間的方法轉(zhuǎn)換，以及設(shè)備設(shè)計(jì)的差異如何導(dǎo)致水動(dòng)力差異。這些流體動(dòng)力學(xué)差異可能導(dǎo)致對(duì)流體動(dòng)力學(xué)敏感的產(chǎn)品的釋放曲線產(chǎn)生較大影響。

案例6：自動(dòng)化系統(tǒng)之間的差異

當(dāng)對(duì)同一批固體口服藥物產(chǎn)品使用相同方法時(shí)，不同儀器（半自動(dòng)溶出度儀E和全自動(dòng)溶出度儀F）之間的溶出曲線存在差異。該方法為槳法，75rpm，pH3.5緩沖液。在一臺(tái)儀器的溶出曲線中觀察到錐體效應(yīng)，但在另一臺(tái)儀器中觀察不到錐體效應(yīng)。

檢查兩臺(tái)儀器后，發(fā)現(xiàn)全自動(dòng)系統(tǒng)F的采樣探頭直徑大于半自動(dòng)系統(tǒng)E的。取樣探頭尺寸的差異可能會(huì)導(dǎo)致容器內(nèi)流體動(dòng)力學(xué)的差異，并導(dǎo)致兩個(gè)系統(tǒng)之間的樣品沉積或錐體差異。

構(gòu)建了三個(gè)模擬全自動(dòng)系統(tǒng)F采樣探針尺寸的采樣探針，以替換半自動(dòng)系統(tǒng)E上六個(gè)采樣探針中的三個(gè)（圖8A）。

使用兩種類型的探針進(jìn)行了溶出運(yùn)行，以比較該系統(tǒng)的溶出曲線和錐體行為。在該溶出運(yùn)行完成時(shí)，切換兩種取樣探頭的位置，并進(jìn)行第二次溶出運(yùn)行，以消除因容器位置引起的任何潛在偏差。圖8B顯示了這些平均溶出曲線（標(biāo)記為批次B）以及先前獲得的半自動(dòng)系統(tǒng)E（標(biāo)記為A批次）的溶出曲線，以及各自的采樣探針。

在半自動(dòng)系統(tǒng)E中使用改進(jìn)的采樣探針改變了溶出曲線。在60分鐘時(shí)觀察到的錐體效應(yīng)較小，并且溶出曲線看起來(lái)與使用全自動(dòng)系統(tǒng)F獲得的溶出曲線更相似

確定是錐體效應(yīng)導(dǎo)致溶出結(jié)果異常后，實(shí)驗(yàn)室更新了溶出方法，以使用尖峰溶出杯來(lái)最小化錐體效應(yīng)，消除對(duì)取樣管尺寸的敏感性，并在儀器E與F之間實(shí)現(xiàn)可再現(xiàn)的溶出曲線。

與此示例類似，以下案例研究也關(guān)注自動(dòng)化以及容器設(shè)計(jì)和設(shè)置中的微小差異如何影響溶出。

案例7：手動(dòng)取樣與自動(dòng)取樣的差異

由于藥典法規(guī)規(guī)定溶出度儀的標(biāo)準(zhǔn)化，使溶出方法很容易轉(zhuǎn)移到其他地點(diǎn)，因此在開(kāi)發(fā)過(guò)程中，通常使用手動(dòng)取樣（手動(dòng)取樣針）作為參考方法。如果獲得與手動(dòng)方法類似的結(jié)果，則可以引入溶出自動(dòng)取樣以提高測(cè)試效率降低勞動(dòng)強(qiáng)度。

在本例中，在早期開(kāi)發(fā)期間使用了全自動(dòng)系統(tǒng)G。配方過(guò)程的改變導(dǎo)致片劑的崩解行為發(fā)生改變，需要重新評(píng)估手動(dòng)和自動(dòng)系統(tǒng)之間的可比性。為了進(jìn)行溶出曲線比較，使用了三種不同的儀器：溶出度儀H為手動(dòng)采樣，用離線紫外分光光度計(jì)測(cè)量樣品；溶出度儀I與在線紫外分光度計(jì)耦合用于半自動(dòng)在線測(cè)量；全自動(dòng)系統(tǒng)G與在線紫紫外分分光光度儀耦合用于全自動(dòng)測(cè)量。溶出方法是槳法，溶媒是900mL pH 4.5緩沖液，緩沖液含有0.2%SLS。

與兩個(gè)自動(dòng)系統(tǒng)相比，手動(dòng)溶出H抽取的樣品產(chǎn)生了最慢且不相似的釋放曲線（圖9A），全自動(dòng)系統(tǒng)G測(cè)量了最快的溶出速率。為了研究在線紫外測(cè)量過(guò)程中半自動(dòng)和全自動(dòng)系統(tǒng)中的影響，如管道和泵的體積，在兩個(gè)系統(tǒng)中的溶出運(yùn)行過(guò)程中抽取了手動(dòng)樣本。與自動(dòng)取樣和測(cè)量相比，手動(dòng)取樣和平行離線測(cè)量產(chǎn)生了類似的溶出曲線（圖9B和9C）。因此，不同溶出曲線的原因必須是溶出度儀溶出杯本身的某種原因。與在手動(dòng)取樣過(guò)程中使用可伸縮套管的溶出度儀H不同，兩個(gè)自動(dòng)系統(tǒng)I與G中的樣品都是通過(guò)中空軸取樣口抽取的。該取樣口是一個(gè)小網(wǎng)眼插入物（圖9D），導(dǎo)致槳軸內(nèi)的表面部分不光滑。此外，全自動(dòng)系統(tǒng)G（圖9D）中的底部閥是在正常光滑的玻璃溶出容器底部插入件。因此，空心軸和底部閥都會(huì)影響溶出杯內(nèi)的流體動(dòng)力學(xué)，并在流體流場(chǎng)中產(chǎn)生局部差異。在本案例研究中，片劑對(duì)溶出杯內(nèi)流體動(dòng)力學(xué)的變化非常敏感，導(dǎo)致崩解和溶出增加。這使得無(wú)法使用全自動(dòng)系統(tǒng)G建立全自動(dòng)溶出方法。

3. 溶出方法

在任何調(diào)查期間，應(yīng)根據(jù)批準(zhǔn)的方法檢查方法參數(shù)。這些包括槳速、容器溫度、介質(zhì)、參考標(biāo)準(zhǔn)制備、取樣和時(shí)間點(diǎn)。存在這樣的例子，即在50 rpm而不是75 rpm下運(yùn)行的方法存在問(wèn)題；由于取樣時(shí)間點(diǎn)接近，且在取樣期間管線中有介質(zhì)冷卻，因此介質(zhì)溫度下降到37±0.5°C范圍之外，該系統(tǒng)在時(shí)間點(diǎn)之間保持管道中的體積；在制備過(guò)程中未全部溶出參考標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致低于計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)濃度；以及使用未經(jīng)該方法驗(yàn)證的原位采樣探針進(jìn)行采樣。由于（手動(dòng)溶出試驗(yàn)）分析員幾乎同時(shí)向所有容器中添加藥物，因此也觀察到不符合藥典取樣時(shí)間限制的方法存在問(wèn)題。這種情況導(dǎo)致后來(lái)的容器在2%的窗口外取樣，因?yàn)榉治鰡T不能足夠快地取樣和過(guò)濾。此外，在將藥片放入容器之前未能停止槳葉，導(dǎo)致藥片在沉入容器時(shí)被移動(dòng)的槳葉擊打，從而導(dǎo)致更快的溶出。如果沒(méi)有正確調(diào)整取樣歧管，當(dāng)在500至900或1000 mL體積之間移動(dòng)時(shí)，也可能會(huì)在藥典區(qū)域（槳頂部和溶媒液位之間的中間位置）外進(jìn)行取樣。

3.1 過(guò)濾器

由于缺少或僅完成部分過(guò)濾器驗(yàn)證，溶出過(guò)濾器可能是溶出問(wèn)題的罪魁禍?zhǔn)?。過(guò)濾器驗(yàn)證應(yīng)確保正確確定廢棄體積，并在溶出曲線中預(yù)期的非常低濃度下進(jìn)行（例如，在非常低濃度下的第一個(gè)時(shí)間點(diǎn)）。當(dāng)在商業(yè)產(chǎn)品上更換過(guò)濾器并且僅在中等強(qiáng)度的標(biāo)稱100%溶出濃度下進(jìn)行丟棄體積選擇時(shí)，已經(jīng)觀察到一個(gè)例子。在測(cè)試較低的強(qiáng)度時(shí)，所選擇的廢棄體積不足以使過(guò)濾器適當(dāng)飽和，并導(dǎo)致人為降低溶出結(jié)果，最終導(dǎo)致OOS結(jié)果。

必須完成的過(guò)濾器驗(yàn)證的第二個(gè)要素是檢查過(guò)濾器效率。這可以通過(guò)在存在未溶出材料的時(shí)間點(diǎn)取樣并使用廢棄體積進(jìn)行過(guò)濾來(lái)實(shí)現(xiàn)。然后應(yīng)分離濾液，其中一部分立即分析，第二部分在分析前進(jìn)行超聲處理或進(jìn)行另一種溶出方法一段時(shí)間。如果過(guò)濾器在阻止未溶出藥物方面效率低下，則第二個(gè)樣品將給出比原始樣品更高的濃度。對(duì)于LC方法來(lái)說(shuō)，消除這一問(wèn)題尤為重要，因?yàn)闃悠房赡茉谧詣?dòng)進(jìn)樣器上停留數(shù)小時(shí)，并且在流動(dòng)相中使用有機(jī)溶劑，這兩者都可能導(dǎo)致藥物顆粒溶出。然后，這些顆粒將溶出在比容器中更小的樣品體積中，對(duì)樣品濃度產(chǎn)生不成比例的影響。由于（藥物或賦形劑的）未溶出顆粒導(dǎo)致光散射效應(yīng)，導(dǎo)致基線升高，需要應(yīng)用校正技術(shù)來(lái)補(bǔ)償，因此過(guò)濾效率低下也會(huì)導(dǎo)致UV方法中的問(wèn)題。理想情況下，過(guò)濾器應(yīng)能有效阻止所有顆粒進(jìn)入樣品，通常，0.45µm的膜足以過(guò)濾掉大多數(shù)藥物和賦形劑，盡管許多自動(dòng)化系統(tǒng)現(xiàn)在可以處理0.22µm膜過(guò)濾器的背壓。

過(guò)濾器驗(yàn)證的最后一項(xiàng)檢查是通過(guò)過(guò)濾溶出介質(zhì)的空白溶液并分析濾液中的干擾物質(zhì)來(lái)評(píng)估可浸出物。大多數(shù)信譽(yù)良好的過(guò)濾器與常見(jiàn)的溶出介質(zhì)沒(méi)有問(wèn)題，但在一些低質(zhì)量的濾膜供應(yīng)商中觀察到了實(shí)例。

案例研究8：溶出曲線的早期峰值

進(jìn)行了溶出研究，其中在早期時(shí)間點(diǎn)溶出的藥物百分比高于隨后的時(shí)間點(diǎn)（圖10）。

在這種情況下，對(duì)未溶出的材料進(jìn)行取樣，將其收集在過(guò)濾器表面上，并在過(guò)濾過(guò)程中溶出，從而產(chǎn)生更高的測(cè)量濃度。這種影響的重要性取決于過(guò)濾器表面上未溶出顆粒的溶出行為、取樣體積和取樣期間施加的壓力。

解決這個(gè)問(wèn)題的方法有三個(gè)方面：

1. 1.使用連接在取樣針前端的預(yù)過(guò)濾器

2. 2.降低樣品體積，以確保仍然達(dá)到最小丟棄體積（結(jié)果是將分析方法從紫外分光光度法改為HPLC分析）

3. 3.在書面方法中仔細(xì)描述取樣程序

4. 

另一個(gè)潛在的挑戰(zhàn)是在所有時(shí)間點(diǎn)使用相同的過(guò)濾器過(guò)濾樣品溶液，以測(cè)定溶出曲線。這可能是為了避免在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)使用過(guò)濾器的成本過(guò)高。在這些情況下，過(guò)濾器表面可能會(huì)殘留未溶出的物質(zhì)，其結(jié)果是在下一個(gè)時(shí)間點(diǎn)溶出，導(dǎo)致樣品中的濃度較高，人為測(cè)量的溶出度較高。從假陽(yáng)性結(jié)果的角度來(lái)看，這也是至關(guān)重要的，因?yàn)樵谝?guī)范時(shí)間點(diǎn)，失敗的溶出性能會(huì)被接受。因此，過(guò)濾器的任何多次使用都需要仔細(xì)評(píng)估這些遺留風(fēng)險(xiǎn)。

除了選擇正確的過(guò)濾器和建立協(xié)議以允許重復(fù)結(jié)果外，過(guò)濾器外殼的幾何形狀也會(huì)對(duì)采樣產(chǎn)生影響。

案例研究9：過(guò)濾器外殼

劑量強(qiáng)度的增加使得有必要在溶出方法中加入表面活性劑（槳式裝置，pH 4.5緩沖液，0.3%SDS，75rpm）。溶出通常在帶有自動(dòng)取樣裝置（ASD）單元的Sotax AT7智能系統(tǒng)上進(jìn)行。在ASD裝置的取樣過(guò)程中，注射器柱塞推動(dòng)空氣通過(guò)注射器過(guò)濾器和套管進(jìn)入溶出容器，以去除可能卡住的顆粒。然后ASD通過(guò)抽取樣本并在取樣前將其推回，對(duì)過(guò)濾器進(jìn)行預(yù)沖洗，隨后將其轉(zhuǎn)移到HPLC瓶中。將SLS添加到溶出介質(zhì)中，再加上1µm Pall Acrodisc過(guò)濾器（圖11B），導(dǎo)致起泡和不全部取樣（圖11A）。使用1µm Pall Acrodisc PSF過(guò)濾器，該過(guò)濾器由與原始過(guò)濾器相同的材料制成，但具有更小、不同形狀的外殼（圖11B），消除了起泡問(wèn)題（圖11A）。盡管本示例可能對(duì)ASD設(shè)置的采樣特別敏感，但它不僅說(shuō)明了過(guò)濾材料和孔徑的重要性，還說(shuō)明了套管幾何形狀的重要性。

3.2 沉降籃

沉降籃可能會(huì)導(dǎo)致方法問(wèn)題。在開(kāi)發(fā)過(guò)程中，評(píng)估沉降籃設(shè)計(jì)對(duì)溶出方法性能的影響非常重要?？诜蒯尞a(chǎn)品的一個(gè)例子是，制劑的釋放嚴(yán)重依賴于聚合物的初始水合作用。在常規(guī)溶出試驗(yàn)中，觀察到了看似隨機(jī)的快速釋放片劑，并引發(fā)了調(diào)查。根本原因被確定與沉降籃有關(guān)：一組六個(gè)不合規(guī)的五線圈日式沉降籃被混合到一盒36個(gè)合規(guī)的七線圈沉降籃中。在聚合物全部水合之前，盤管數(shù)量的減少使配方受到更快速的侵蝕。這意味著實(shí)驗(yàn)室應(yīng)仔細(xì)控制沉降籃組，并采用標(biāo)簽管理系統(tǒng)，以確保在將沉降籃組引入實(shí)驗(yàn)室之前對(duì)其進(jìn)行標(biāo)記和記錄。在對(duì)經(jīng)批準(zhǔn)的產(chǎn)品進(jìn)行沉降片設(shè)計(jì)轉(zhuǎn)換之前，進(jìn)行全面風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估以確保與歷史數(shù)據(jù)相等也是很重要的。

其他常見(jiàn)問(wèn)題與藥物相對(duì)于其平衡濃度過(guò)飽和的方法有關(guān)，如下一個(gè)案例研究所示。

案例10：采樣后沉淀

在合同制造機(jī)構(gòu)（CMO）使用槳式裝置以50 rpm（60分鐘后+沖擊轉(zhuǎn)速200 rpm）在900 mL無(wú)酶模擬胃液（SGFsp）、pH 4.5的乙酸鹽緩沖液和pH 6.8的無(wú)酶模擬腸液（SIFsp）中進(jìn)行具有pH依賴性溶出度的弱堿性開(kāi)發(fā)藥物的比較溶出試驗(yàn)。在SGFsp中溶出快速、穩(wěn)定，但在pH 4.5和SIFsp pH 6.8下觀察到高可變性和出乎意料的高溶出值（相對(duì)于低溶出度）（圖12A）

由于pH 4.5和SIFsp pH 6.8下的溶出度限制了溶出過(guò)程，并且由于在HPLC分析之前未稀釋CMO處的溶出樣品，因此評(píng)估了采樣期間/之后藥物過(guò)飽和和沉淀的假設(shè)。在沒(méi)有稀釋的情況下，在公司內(nèi)部實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)CMO實(shí)驗(yàn)，證實(shí)了高可變性和意外的高溶出值。

相反，在過(guò)濾后和HPLC分析之前引入稀釋步驟（用0.1N鹽酸1:1），得到了pH 4.5和SIFsp pH 6.8的顯著更低（如預(yù)期）和更穩(wěn)健/更少的可變?nèi)艹鼋Y(jié)果，如圖12B所示。因此，可以假設(shè)在HPLC分析過(guò)程中，沉淀的藥物顆粒最有可能從HPLC瓶中取出并注射到HPLC系統(tǒng)中。反過(guò)來(lái)，在HPLC運(yùn)行期間用流動(dòng)相稀釋的沉淀顆粒的注射導(dǎo)致了高可變性和HPLC柱上過(guò)高的“局部"藥物濃度。

4. 環(huán)境與人

溶出問(wèn)題，就像所有基于實(shí)驗(yàn)室的問(wèn)題一樣，可能是由于在考慮不周的地點(diǎn)進(jìn)行測(cè)試，或者是由于個(gè)人培訓(xùn)不足造成的。觀察到一個(gè)訓(xùn)練水平不足的例子，在人工取樣溶出時(shí)，從溶出杯1到6觀察到明顯的正偏差。這個(gè)問(wèn)題是由于分析師在1分鐘的時(shí)間內(nèi)搖晃著放下藥片，而槳葉在整個(gè)時(shí)間內(nèi)都沒(méi)有轉(zhuǎn)動(dòng)；在容器6中的片劑滴下后開(kāi)始攪拌，然后在15分鐘取樣，再錯(cuò)開(kāi)1分鐘。這一過(guò)程的最終結(jié)果是，容器1中的片劑經(jīng)歷了5分鐘的停滯“浸泡"，然后是15分鐘的槳葉轉(zhuǎn)動(dòng)，而容器6經(jīng)歷了20分鐘的槳葉旋轉(zhuǎn)，其他容器介于兩者之間。這被確定為實(shí)驗(yàn)室培訓(xùn)問(wèn)題，并通過(guò)對(duì)受影響實(shí)驗(yàn)室的溶出技術(shù)分析師進(jìn)行再培訓(xùn)，以及引入更清晰的手動(dòng)溶出操作程序（即，只需停止槳足夠長(zhǎng)的時(shí)間，使藥片下沉，然后在錯(cuò)開(kāi)時(shí)間再次打開(kāi)槳）來(lái)解決。

溶出是一種視覺(jué)觀察非常重要的技術(shù)。專家在調(diào)查過(guò)程中的第一個(gè)問(wèn)題通常是，“溶出杯的情況如何？"讓受過(guò)良好培訓(xùn)的分析師在溶出過(guò)程中進(jìn)行觀察，并在觀察潛在問(wèn)題時(shí)使用手機(jī)或其他實(shí)驗(yàn)室記錄設(shè)備拍攝照片或視頻，通?？梢宰C明這對(duì)于找到根本原因是非常寶貴的。或者，在開(kāi)發(fā)過(guò)程中，配備適當(dāng)放置的攝像機(jī)（例如下圖的攝像裝置）和所有溶出測(cè)試的視頻記錄的儀器設(shè)置尤其有助于減輕分析師注意異?；顒?dòng)、執(zhí)行觀察和/或記錄證據(jù)的負(fù)擔(dān)，同時(shí)遵守采樣時(shí)間要求。觀察錐形、“舞動(dòng)"、漂浮、薄膜形成、膠囊溶出過(guò)程中的破裂點(diǎn)、過(guò)量氣泡、泡沫或材料粘附在槳/容器上，對(duì)于確定異常溶出性能是否存在任何肉眼可見(jiàn)的原因非常重要。因此，在進(jìn)行溶出試驗(yàn)時(shí)，最好培訓(xùn)分析師定期記錄目視觀察結(jié)果。

解散調(diào)查中的一個(gè)重要步驟是分析師訪談或方法演練（有時(shí)稱為Gemba walk）。通過(guò)觀察實(shí)驗(yàn)室正在進(jìn)行的測(cè)試，而不是假設(shè)測(cè)試是按照經(jīng)理或?qū)＜业钠谕M(jìn)行的，從而在調(diào)查中取得了許多突破。在一個(gè)例子中，觀察到了方法性能的突然變化，只有在方法演練過(guò)程中，溶出專家才發(fā)現(xiàn)另一個(gè)由不同組安裝的設(shè)備在實(shí)驗(yàn)室工作臺(tái)上引起了過(guò)度振動(dòng)，影響了溶出測(cè)試。

環(huán)境和人的最終組成部分是數(shù)據(jù)完整性和驗(yàn)證。當(dāng)觀察到異常結(jié)果時(shí)，應(yīng)該由第二位科學(xué)家檢查數(shù)據(jù)，并確認(rèn)錯(cuò)誤，確保沒(méi)有簡(jiǎn)單的解釋，如轉(zhuǎn)錄或計(jì)算錯(cuò)誤。在開(kāi)始任何調(diào)查之前，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室第二科學(xué)家審查程序檢查所有異常溶出數(shù)據(jù)。

5. 檢測(cè)

魚骨圖上的最后一個(gè)區(qū)域是標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液中藥物濃度的測(cè)量。應(yīng)對(duì)方法系統(tǒng)適用性標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢查和趨勢(shì)分析，以確保在預(yù)期范圍內(nèi)運(yùn)行。異常的高或低標(biāo)準(zhǔn)響應(yīng)可能表明參考標(biāo)準(zhǔn)品的稱重或溶出存在問(wèn)題，或燒瓶尺寸、紫外比色皿路徑長(zhǎng)度或波長(zhǎng)不正確。

如果使用色譜法，應(yīng)謹(jǐn)慎檢查流動(dòng)相，以確保它們已正確制備，在保質(zhì)期內(nèi)，具有正確的pH值，并安裝在正確的流動(dòng)相管線上。同樣，應(yīng)檢查色譜柱，以確保選擇了正確的相、尺寸和粒度。

如果該方法未明確說(shuō)明如何進(jìn)行溶出計(jì)算，或者該方法處于早期開(kāi)發(fā)階段，且未充分定義和驗(yàn)證，則溶出計(jì)算本身可能是問(wèn)題的根源。由于不正確或不一致地使用溶出百分比值的計(jì)算，出現(xiàn)了問(wèn)題。這些通常是由于取樣和針頭沖洗導(dǎo)致的運(yùn)行過(guò)程中體積變化導(dǎo)致的。這可以通過(guò)使用經(jīng)驗(yàn)證的工具和/或現(xiàn)成的計(jì)算工具來(lái)處理數(shù)據(jù)而容易地避免。所有溶出杯的持續(xù)低或高結(jié)果通常與計(jì)算問(wèn)題或稀釋系數(shù)問(wèn)題有關(guān)。

對(duì)于片劑重量、測(cè)定或沖擊轉(zhuǎn)速時(shí)間點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化，應(yīng)謹(jǐn)慎使用單獨(dú)的溶出杯校正，并應(yīng)明確標(biāo)記為已校正的數(shù)據(jù)，以避免在與未校正的歷史數(shù)據(jù)進(jìn)行比較時(shí)得出錯(cuò)誤的結(jié)論。

最后，重要的是確保所有分析均在樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性窗口內(nèi)進(jìn)行，并且所有分析樣品均正確儲(chǔ)存在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)（例如，如果需要，應(yīng)避光），因?yàn)槲茨馨凑镇?yàn)證儲(chǔ)存樣品可能會(huì)使任何數(shù)據(jù)失效。

偏差調(diào)查總結(jié)

原文：Dissolution Method Troubleshooting: An Industry Perspective，James Mann等